QB 2525—2001 食品添加劑葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶（完整版）
QB 2525—2001.
f)5%苯酚溶液:將苯酚(CH,OH) 5g于60℃溶于50 mL水，將溶液冷卻至室溫，用水稀釋至100 mL;
g)4-氨基安替比林-苯酚顯色劑:在 Tris-磷酸緩沖液（pH7.2）40 mL中，加入葡萄糖氧化酶(5 mg 葡萄糖氧化酶“Amano”2)550單位和過(guò)氧化物酶（0.76 mg，16$ U/mg的過(guò)氧化物酶“Amano”2) 125單位，再加入0.4%4-氨基安替比林溶液1 mL和5%苯酚溶液1.4 mL，用Tris-磷酸緩沖液（pH7.2)稀釋至50 mL(隨配隨用);
h)底物溶液:將α-甲基葡萄糖(CH,0;)2.0g溶解于水50 mL中，用水稀釋至100mL<5℃~15℃可穩(wěn)定二星期)。
4.1.3測(cè)定方法
`4.1.3.1 樣品溶液的制備
用酶制劑配制酶溶液使其0.5 mL的Ao-A介于0.15和0.32之間:吸取酶制劑1 mL,加到一個(gè)適當(dāng)大小的容量瓶中，用經(jīng)冷卻的水稀釋至刻度，混勻。
示例:α-葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶L“Amano":[n-300〕稀釋1 mL--300 mL。
4.1.3.2測(cè)定
吸取底物溶液（4.1.2h）1mL和0.02 molL乙酸-乙酸鈉緩沖液（pH5.0)(4.1.2c)1mL`加入試管(15 mm× 150 mm)內(nèi)，在（40±0.5）℃的恒溫水浴箱中保溫10 min。加入樣品稀釋酶液（4.1.3.1）0. 5 mL，混勻，于（40士0.5)℃的恒溫水浴箱中準(zhǔn)確保溫60 min后，將試管轉(zhuǎn)移至沸水浴中加熱 5 min，然后用流水快速冷卻。冷卻后，吸此溶液0.1 mL到試管中，并加入4-氨基安替比林-苯酚顯色劑(4.1.2g) 3 mL,混勻.將此試管放入（40土0.5)℃的恒溫水浴中，保溫20 min，測(cè)定500 nm處的吸光度Aso。
空白對(duì)照:吸0.02 molL乙酸-乙酸鈉緩沖液(pH5.0)(4.1.2c） 1 mL和樣品稀釋酶液(4.1.3.1)0.5mL加入試管(15mm× 150mm)內(nèi)，混勻。將試管轉(zhuǎn)移至沸水浴中加熱5min,然后用流水快速冷卻。冷卻后，加入底物溶液（4.1.2h) 1 mL，混勻。吸此溶液0.1 mL至空試管（15 mm× 150 mm)內(nèi)，加入4-氨基安替比林-苯酚顯色劑（4.1.2 g) 3 mL，混勻。將此試管放入《40士0.5）℃的恒溫水浴中，保溫20min，測(cè)定500nm處的吸光度A。
精確稱(chēng)取105℃下干燥6h的葡萄糖(CH,0) 1.000g，溶于100mL水中，分別取1mL,2mL，3mL，4mL，5mL，用水定容至100mL(每1mL該溶液分別含有100 pg , 200 ug,300 ug . 400 ug和500 ug的葡萄糖)。
分別吸取以上葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0.1 mL和4-氨基安替比林-苯酚顯色劑(4.1.2g) 3 mL,加入試管（15 mm×150 mm）內(nèi)，混勻。將這些試管放入（40士0.5）℃的館溫水浴箱中，保溫20mnin，測(cè)定波長(zhǎng)500 nm處的吸光度AsosAs2o，As3AssoAsso。
·標(biāo)準(zhǔn)液的空白對(duì)照:用水來(lái)替代葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，按上述方法測(cè)定空白對(duì)照液吸光度Aso。
4.1.4 分析結(jié)果的表述
在此試驗(yàn)條件下，在反應(yīng)混合物2.5 mL 中，60min產(chǎn)生1 ug葡萄糖所需的酶量定義為一-個(gè)α-葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶活力單位。
